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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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石斑魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
  • 品牌:帛科
  • 產(chǎn)地:進口、國產(chǎn)
  • 貨號:BKP7427
  • 價格: ¥3800/盒
  • 發(fā)布日期: 2020-06-24
  • 更新日期: 2024-12-25
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進口、國產(chǎn)
品牌 帛科
貨號 BKP7427
用途 公司產(chǎn)品僅用于科研
包裝規(guī)格 50T
純度 詳見說明書%
CAS編號
是否進口

熒光定量PCR服務:
簡介:實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1
、熒光定量PCR服務要求:
01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
03)請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2
、產(chǎn)品僅供科研使用熒光定量PCR操作程序
01)引物(探針)設計與合成。
02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結(jié)果分析。
04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實驗材料。
3
、熒光定量PCR的收費標準:
 
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

概述:
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中,隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增,PCR產(chǎn)物不斷積累,熒光信號也會相應的增加,這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNARNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

產(chǎn)品名稱

英文名稱

貨號

石斑魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒


BKP7427

使用方法:
一、石斑魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL610倍稀釋度為例)
1.
注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2.
標記6個離心管,分別為7,65,43,2。
3.
用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.
7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5.
換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6.
換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7.
重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8.
如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?/span>10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PCNC的體積也必須是200μL。
9.
用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10.
如果只做1次重復,則標記N+9PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數(shù)量相應增加23倍。
11.
產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)

實驗過程:
產(chǎn)品僅供科研使用一、試劑準備
1. DNA
模板
2
.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3
10×PCR Buffer
4
2mM dNTPmix:含dATP、dCTPdGTP、dTTP2mM
5
Taq
二、操作步驟
1
.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物110pM               2μl
引物210PM              2μl
Taq
酶(2U/μl            1μl
DNA
模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2
.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93 40s → 58 30s → 72 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72 保溫7min。
3
.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4待電泳檢測或-20長期保存。
4
PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
實時熒光定量PCR
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的:
1
Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性極好,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2
Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性*的定量方法,已得到全世界的公認,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物考核、病原體檢測等諸多領域。

IFNAR2 Others Human IFNAR2 / IFNABR 人細胞裂解液 (陽性對照) 2,3,6,7,10,11-六甲氧基三亞苯(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)2,3,6,7,10,11-Hexamethoxytriphenylene

人細胞;Hela2,3,6,7,10,11-六羥基三亞苯水合物(>95.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)2,3,6,7,10,11-Hexahydroxytriphenylene Hydrate

APOL1 Others Human APOL1 / apolipoprotein L1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 2,3,6,7,10,11-六乙酰氧基三亞苯(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)2,3,6,7,10,11-Hexaacetoxytriphenylene

CL-0421RAG(小鼠腎腺癌細胞)5×106cells/瓶×22,3,6,7,10,11-六溴三亞苯(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)2,3,6,7,10,11-Hexabromotriphenylene

人羊膜上皮細胞 雙位點HC-KIT受體細胞株,DMF7細胞 BLO-11(小鼠骨骼成纖維細胞)1--4-正辛基苯(>90.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)1-Bromo-4-n-octylbenzene
PC-3M(
人細胞) 5×106cells/瓶×2氧化白藜蘆醇質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BROxyresveratrol

HCAEC Pellet 人內(nèi)皮細胞團塊 > 1 mio.cells 口腔角質(zhì)細胞生長添加物OKGS乙?;邹继J醇(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標準品Acetyl-resveratrol

CL-0316A7r5(大鼠胸大動脈平滑肌細胞)5×106cells/瓶×2乙?;邹继J醇質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BRAcetyl-resveratrol

CD63 Others Rat 大鼠 CD63 / Tspan-30 / Teaspanin-30 人細胞裂解液 (陽性對照) Fmoc-L-丙氨酸質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRFmoc-Ala-OH

人海馬趾星形膠質(zhì)細胞總RNAHA-h NAFmoc-L-苯丙氨酸質(zhì)量規(guī)格:0.98Fmoc-Phe-OH
HA Others H9N2
甲型 H9N2 (A/Guinea fowl/Hong Kong/WF10/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) TERRIFICBROTH,POWDER*肉湯, 粉末生物技術(shù)級100GRT

HL-60, 人早幼粒細胞鉬醋銨;四水合鉬醋銨;七鉬醋銨;仲鉬醋銨 cMMoniuM hqptcMolybdctq tqtrchydrctq;Molybdic ccid cMMoniuM sclt tqtrchydrctq;cMMoniuM hqptcMolybctq;HqxccMMoniuM hqptcMolybdctq tqtrchydrctq 1024-82-

IL17RA Others Mouse 小鼠 IL17RA / IL17R / CD217 人細胞裂解液 (陽性對照) H-Glu-PNAL-谷酰基-4-硝基本胺100毫克BR,98%

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞(傣族);KM9405胞嘧啶25

GP2-293Luc細胞,人胚腎上皮包裝細胞 綠猴恒河猴腎細胞,LLC-MK2細胞 CL-0348Hce-8693(人盲腸腺癌細胞(未分化))5×106cells/瓶×2(豬膽鹽)
石斑魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒ME-180 人子宮頸表皮癌細胞4-(己氧基)(>98.0%(GC))4-(Hexyloxy)benzaldehyde質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)

NCI-H292人細胞(結(jié)轉(zhuǎn)移) NCI-H292 human lung cancer cells (lymph node metastasis) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS4-庚氧基苯(>98.0%(GC)(T))4-Heptyloxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)

KITLG Protein Mouse 重組小鼠 SCF / C-kit ligand 蛋白 (His 標簽)4-差向-地美環(huán)素4-epi-Demeclocycline質(zhì)量規(guī)格:美國進口

人葡萄膜色素細胞;UM 人氣管平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL頭孢喹諾Cefquinome質(zhì)量規(guī)格:美國進口

急性T細胞細胞;TALL-104頭孢噻呋Ceftiofur質(zhì)量規(guī)格:美國進口


聯(lián)系方式
手機:13564080845