產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3717 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
茄病鐮刀菌PCR檢測試劑盒直銷 | Fusarium solaniPCR | BKP3717 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:茄病鐮刀菌PCR檢測試劑盒直銷使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
HA Others H5N2 甲型 H5N2 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 月示胨shēng huà shì jì容量:2~8℃,避光1克
溶液AMS玉米漿 Corn steep liquor 66071-94-1 500G 通用試劑
GALK1 Others Human 人 GALK1 / Galactokinase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 乳糖蛋柏胨培養(yǎng)基 Lcctosq mqdium
人絨癌細胞;JEG-3TRYPSININHIBITOR,SOYBEAN胰蛋白酶抑制劑,大豆試劑級米白色凍干粉FROZENsigma
LLC Lewis細胞,細胞 人細胞,(+)9811細胞 猴腎細胞;vero IgRCD4-7784-30-71酸鋁AluMinuM phosphate
豚鼠胚胎細胞;104C1紫檀芪(標(biāo)準品)Pterostilbene質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準品
LTEP-a-2細胞,人 猴腎細胞系,VERO E6細胞 CM-M050小鼠卵巢顆粒細胞完全培養(yǎng)基100mL紫檀芪,紫檀Pterostilbene質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
SHG-44 (人細胞) 5×106cells/瓶×2魚藤酮Rotenone質(zhì)量規(guī)格:>90%,BR
NHEK.f-c pooled 正常人表皮角質(zhì)形成細胞(NHEK)少年,混合 500,000cells 原代上皮細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝:1ml7-表紫杉醇(標(biāo)準品)7-Epitaxol質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準品
子宮成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)澳洲茄胺;澳州茄胺(標(biāo)準品)Solasodine質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準品
茄病鐮刀菌PCR檢測試劑盒直銷人前脂肪細胞完全培養(yǎng)基 100mL海醇Iohexol質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
MC細胞,大鼠巨噬細胞 THP-1(人單核細胞) 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4A麥芽1酸化酶, 硫酸銨懸浮液Maltose Phosphorylase 5U/mg質(zhì)量規(guī)格:BC Grade
EFNB1 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His 標(biāo)簽)嗪草酮(>95%,植物激素級)Metribuzin質(zhì)量規(guī)格:>95%,植物激素級
BC-019(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠瘤細胞;P388D1(IL-1)4-甲基傘形酮酰-alpha-D-吡喃糖苷MU-alpha-GAL質(zhì)量規(guī)格:分子生物學(xué)級
人卵巢腺癌細胞;SK-OV-3粘酸(>98%,BC)Mucic acid質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC
ALCAM Others Mouse 小鼠 ALCAM / CD166 人細胞裂解液 (陽性對照) 阿托伐他汀甲酯質(zhì)量規(guī)格:美國進口Atorvastatin Methyl Ester
腎小管上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)氮卓斯汀-13C,d3質(zhì)量規(guī)格:美國進口Azelastine-13C,d3
IL18RAP Others Mouse 小鼠 IL18RAP / IL1R7 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) N-去甲氮卓斯汀質(zhì)量規(guī)格:美國進口N-Desmethyl Azelastine
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細胞;PUMC-mips-C4(S)-鹽酸氮卓斯汀質(zhì)量規(guī)格:美國進口(S)-Azelastine Hydrochloride
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO 1beta9,12.5 Clone 36 細胞,C127細胞 J774A.1細胞,鼠腹水單核細胞瘤阿替洛爾-d7質(zhì)量規(guī)格:美國進口Atenolol-d7