產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4092 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
皮諾卡菌PCR檢測試劑盒價格 | Nocardia farcinicaPCR | BKP4092 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達(dá)量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:皮諾卡菌PCR檢測試劑盒價格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
EPHB1 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphB1 / EPHT2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) shēng huà shì jì容量:250克
CL-0181P3X63Ag8(小鼠細(xì)胞)5×106cells/瓶×2D-正亮酸 D-Norleucine,99% 327-56-0 500MG 通用試劑
HR-8348細(xì)胞,直腸腺癌 人細(xì)胞瘤細(xì)胞,JK(Jurkat)細(xì)胞 人小細(xì)胞;NCI-H22271,3,9-三基皇嘌呤 ≥98% (HPLC) ISOCcFFqINq 219-3-4
Acc-2(人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ號營養(yǎng)瓊脂shēng huà shì jì容量:500毫升
ERBB2 Others Human 人 ErbB2 / HER2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 酸;敗脂酸metxyl acrylate;2-Propenoic acid metxyl ester
CCL21 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CCL21 / 6Ckine 蛋白瑞舒伐他汀/羅蘇伐他汀游離酸Rosuvastatin質(zhì)量規(guī)格:>97%,游離酸
P19(小鼠) 5×106cells/瓶×2 野豬 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 蘇丹I/溶劑黃14Sudan I/Solvent Yellow 14質(zhì)量規(guī)格:BS生物染色級
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;MEF蘇丹II/蘇丹2/溶劑橙7Sudan II /Solvent Orange 7質(zhì)量規(guī)格:BS
KDM1A Others Human 人 KDM1 / LSD1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 蘇丹Ⅲ/III/溶劑紅23Sudan3質(zhì)量規(guī)格:BS
HGC-27人細(xì)胞蘇丹Ⅳ/4/溶劑紅24Sudan IV/Solvent Red 24質(zhì)量規(guī)格:BS
皮諾卡菌PCR檢測試劑盒價格血小板衍生生長因子L-絲氨酸L-Serine質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
人肺動脈成纖維細(xì)胞 (HPAF)( 5×105 ) RLFs, 大鼠 RattusL-抗壞血酸鈉 L-ascorbate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
犬腎細(xì)胞;MDCK/IgR焦1酸鈉(AR) pyrophosphate質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR
FAM3D Others Mouse 小鼠 FAM3D / Oit1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 碳酸氫銨(AR)Ammonium bicarbonate質(zhì)量規(guī)格:AR
人上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL氯化銨(AR)Ammonium chloride質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,AR
ECE1 Others Human 人 ECE1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 血清兔抗人IgGshēng huà shì jì容量:250克
人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞;NCI-H295R啊利新藍(lán)8GS cLCIcN BLUq 8GX 1633-92-3
EFNB3 Others Rat 大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3-環(huán)己基炳醋 Cyclohqxcnqpropionic ccid 701-97-3
人直平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL1shēng huà shì jì容量:RT10克
L1210細(xì)胞,小鼠細(xì)胞 多形擬桿菌 大額牛腎細(xì)胞;BFR-K1(1酸肌酸鈉)
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。