產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4354 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線(xiàn)放線(xiàn)桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 貨號(hào) |
綿羊痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū) | Sheeppox Virus(SPPV)PCR | BKP4354 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過(guò)與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:綿羊痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
6-Amino-1-methyluracil 2434-53-9 中文名: 分子式:C5H7N3O2 兔子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Gimeracil 103766-25-2 中文名:吉莫斯特 分子式:C5H4ClNO2 Rat vascular endothelial cell growth factor receptor 1 (VEGFR-1) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1(VEGFR-1)ELISA試劑盒
Amlexanox ethyl ester 68301-99-5 中文名: 分子式:C18H18N2O4 HumanAi-keratinaibody,AKAELISAKit 人抗角蛋白抗體(AKA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
1,2-Cyclohexanedicarboximide 7506-66-3 中文名: 分子式:O2 Humancytokeratin13,CK-13ELISA試劑盒人細(xì)胞角蛋白13(CK-13)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Perospirone 129273-38-7 中文名:鹽酸哌羅匹隆 分子式:C23H31ClN4O2S 組織HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20次
兔堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 英文名稱(chēng): Rabbit Basic Fibroldast Growth Factor 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫(xiě): BFGF 4β-Hydroxywithanolide E 54334-04-2 中文名:4β-羥基醉茄內(nèi)酯E 分子式:C28H38O8 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 蛻皮甾體拮抗劑; ; 酸漿屬; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)
兔堿性成纖維生長(zhǎng)因子(rabbit b-FGF/FGF-2) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 5-[Bis(2-hydroxyethyl)amino]-1-methyl-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester 中文名: 分子式:C18H27N3O4
兔堿性0酸酶(ALP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 5-(4-((3-chloro-4-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-6-yl)furan-2-carbaldehyde 中文名: 分子式:C26H17ClFN3O3 度:98.0%
兔基質(zhì)細(xì)胞衍化生長(zhǎng)因子1a 英文名稱(chēng): Rabbit Somal cell Derived Factor 1a 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫(xiě): SDF1a 4-Benzoyl 4'-methyldiphenyl sulfide 中文名:4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚 分子式:C20H16OS 度:98.0%
兔基質(zhì)金屬蛋白酶-9(rabbit MMP-9) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 4-O-(3-nitropropanoyl)corollin 中文名: 分子式:C18H24N4O18
綿羊痘病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)NCI-H716(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 3T3-L1(小鼠脂肪細(xì)胞)N'-Fmoc-L-賴(lài)氨酸質(zhì)量規(guī)格:>98%Fmoc-Lys-OH
CL-0318B16-F1(小鼠色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2Fmoc-天門(mén)冬氨酸-β-芐酯質(zhì)量規(guī)格:>98%Fmoc-L-aspartic acid β-benzyl ester
REG1B Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1B / PSPS2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 芴甲氧羰基-L-天冬氨酸-1-叔丁酯質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRFmoc-Asp(OH)-OtBu
人真皮微內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHDMEC NAFmoc-L-賴(lài)氨酸鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格:0.98Fmoc-Lys-OH·HCl
MDA-MB-435S細(xì)胞,人癌細(xì)胞 鼠成纖維細(xì)胞系,GR細(xì)胞 原代神經(jīng)元細(xì)胞特制基礎(chǔ)無(wú)血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100ml氧化白藜蘆醇(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Oxyresveratrol
人纖維環(huán)細(xì)胞HAFC1-溴-4-壬基苯(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)1-Bromo-4-nonylbenzene
FSTL1 Others Mouse 小鼠 FSTL1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1-溴-4-戊苯(>90.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)1-Bromo-4-pentylbenzene
大額牛與婆羅門(mén)牛雜交F1代皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-61-溴-4-己苯(>90.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)1-Bromo-4-hexylbenzene
大鼠細(xì)胞;UMR-106 ,LTEP-a-2細(xì)胞 MSCS細(xì)胞,猴的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞1-溴-4-庚苯(含穩(wěn)定劑銅屑)(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)1-Bromo-4-heptylbenzene (stabilized with Copper chip)
PANC-1, 人細(xì)胞 Human1-溴-4-正辛基苯(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)1-Bromo-4-n-octylbenzene
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。