產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號(hào) | BKP4418 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號(hào) | |
是否進(jìn)口 | 是 |
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書 | BKP4418 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實(shí)驗(yàn)步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
Alogliptin benzoate 850649-62-6 中文名:阿格列汀苯甲酸鹽 分子式:C25H27N5O4 人組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
2-[(6-Chloro-3,4-dihydro-3-methyl-2,4-dioxo-1(2H)-pyrimidinyl)methyl]benzonitrile 865758-96-9 中文名: 分子式:C13H10ClN3O2 人組織蛋白酶抗體(CathAb)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Alogliptin 850649-61-5 中文名:阿格列汀 分子式:C18H21N5O2 人組織蛋白酶S(cath-S)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
(-)-Mandelic acid benzyl ester 97415-09-3 中文名:D-(-)-扁桃酸芐酯 分子式:C15H14O3 人組織蛋白去乙?;?/span>elisa試劑盒 人組織蛋白去乙?;冈噭┖?/span> 規(guī)格型號(hào):96T/48T 人組織蛋白去乙?;冈噭┖校?guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(分裝),產(chǎn)品別名:人組織蛋白去乙酰化酶試劑盒、人組織蛋白去乙?;?/span>elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
4-(4-Fluorophenyl)-6-isopropyl-2-[(N-methyl-N-methylsulfonyl)amino]pyrimidinyl-5-yl-formyl 147118-37-4 中文名: 分子式:C16H18FN3O3S 人組織蛋白酶抗體elisa試劑盒 人組織蛋白酶抗體試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 人組織蛋白酶抗體試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(分裝),產(chǎn)品別名:人組織蛋白酶抗體試劑盒、人組織蛋白酶抗體elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
兔子可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 (Z)-Lachnophyllum lactone 81122-95-4 中文名: 分子式:C10H10O2 度:% 關(guān)鍵詞: 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)
兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 8,14-Epoxyergosta-4,22-diene-3,6-dione 1265908-20-0 中文名: 分子式:C28H40O3
兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISAKit ELISA. 96T/48T 8-Bromo-7-(but-2-yn-1-yl)-3-methyl-1H-purine-2,6(3H,7H)-dione 中文名: 分子式:C10H9BrN4O2
兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 (tert-Butoxycarbonyl)oxycefcapene pivoxil 中文名: 分子式:C28H37N5O10S2 度:98.0%
兔子可溶性CD40配體elisa試劑盒 兔子可溶性CD40配體試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔子可溶性CD40配體試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(分裝),產(chǎn)品別名:兔子可溶性CD40配體試劑盒、兔子可溶性CD40配體elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 8-Hydroxyhyperforin 8,1-hemiacetal 中文名: 分子式:C35H52O5
病毒PCR檢測(cè)試劑盒說明書LAYN Others Human 人 Layilin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 硫酸鈣(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRCalcium sulfate, anhydrous
CM-H084人臍平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL二環(huán)己基碳二亞胺(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRDCC, Dicyclohexylcarbodiimide
SERPINI1 Others Mouse 小鼠 SerpinI1 / Neuroserpin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 丁二酸二甲酯(>99%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRDimethyl succinate
小鼠角膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL二甲基甲酮鈉鹽(>97%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>97%,BRDimethylglyoxime salt
L6565小鼠克隆細(xì)胞系 L6565 murine leukemia cell line RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS直接藍(lán)71(≥50%,BR)質(zhì)量規(guī)格:≥50%,BRDirect blue 71
軟骨細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)N-苯甲酰-2'-脫氧胞苷質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRbz-dC
MAP3K8 Others Human 人 TPL2 / MAP3K8 / MEKK8 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) N6-苯甲酰-2'-脫氧腺苷質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRbz-dA
KM小鼠子瘤株;U145'-O-三苯甲基尿苷質(zhì)量規(guī)格:>97%,BRTrt-rU
NIH/3T3細(xì)胞,胚胎成纖維細(xì)胞 人高轉(zhuǎn)移細(xì)胞,LM3細(xì)胞 CL-0104HEp-2(人喉表皮樣癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2Trt-dU質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRTrt-dU
倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21N2-洛沙坦-洛沙坦(洛沙坦雜質(zhì))質(zhì)量規(guī)格:N2-Losartanyl-losartan (Losartan Impurity)
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。