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| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | BK-P64630 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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枯草芽孢桿菌PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64630 |
實(shí)驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實(shí)驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-5beta 41,2.5 CL5 Carrying P5b/dhfr 腹水瘤細(xì)胞，S-180細(xì)胞 SVEC4-10細(xì)胞，小鼠結(jié)上皮樣細(xì)胞青霉素(>95%(HPLC),BC)Penitrem A from Penicillium palitans質(zhì)量規(guī)格：>95%(HPLC),BC
永生化表皮細(xì)胞;HaCaTβ-D-半乳糖五乙酸酯(>98%，BR)Pentaacetyl-β-D-galactopyranose質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR
CTLA4 Others Mouse 小鼠 CTLA4 / CD152 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 造沸石Permutit質(zhì)量規(guī)格：Tech Grade
猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞;ELS1酚肽二1酸四鈉(>96%,BC)Phenolphthalein diphosphate tetra salt質(zhì)量規(guī)格：>96%,BC
Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragme (aa 383-502) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 吩噻嗪(>98%,BR)Phenothiazine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)4-氯-1-萘酚(4C1N)4-Chloro-1-naphthol (4-CN)質(zhì)量規(guī)格：0.99
FCGR2A Others Human CD32a / FCGR2A 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 親和素；卵白素來源于雞蛋白Avidin from egg white質(zhì)量規(guī)格：10-15 units/mg protein,進(jìn)分
AtT20 小鼠細(xì)胞2,2',4,4'-四羥基二苯甲酮(>95.0%(T))2,2',4,4'-Tetrahydroxybenzophenone質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)
大鼠肺細(xì)胞;WL12,4,4'-三羥基二苯甲酮(>98.0%(HPLC)(T))2,4,4'-Trihydroxybenzophenone質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)
MDA-MB-231, 癌細(xì)胞2,3',4,4'-四羥基二苯甲酮(>90.0%(GC)(T))2,3',4,4'-Tetrahydroxybenzophenone質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)(T)
主動脈平滑肌細(xì)胞cDNAHASMC cDNA噴托維林Carbetapentane質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
IFNA4 Others Rat 大鼠 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 卡洛芬乙酯 (卡洛芬雜質(zhì))Carprofen Ethyl Ester (Carprofen Impurity)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
皮下脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL外消旋卡洛芬-d3rac Carprofen-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
C2C12細(xì)胞，鼠肌原細(xì)胞 H08910(細(xì)胞) 大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞;INS-1長春質(zhì)堿-d3Catharanthine-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
EFNB1 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)阿苯達(dá)唑砜Albendazole Sulfone質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
低分化;SK-LU-1 大鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL2'-脫氧肌酐-5'-1酸鈉(>98%,BR)2'-Deoxyinosine-5'-monophosphate salt質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
MMQ 小鼠細(xì)胞鄰乙氧基苯(>98%,BR)2-Ethoxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
TIMP2 Others Human TIMP2 / TIMP-2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2-硝基芴(>99.0%(HPLC))2-Nitrofluorene質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(HPLC)
色素細(xì)胞生長添加物(不含TPA)MelGS-29,9'-螺二[9H-芴](>98.0%(HPLC))9,9'-Spirobi[9H-fluorene]質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)
SCN2B Others Human SCN2B 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2-氨基蒽(>98.0%(GC)(T))2-Aminoanthracene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)
實(shí)驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時熒光定量PCR（quantitative
real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
枯草芽孢桿菌PCR試劑盒主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
