|
| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號(hào) | BK-P64714 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
|
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
|
牛呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR 試劑盒 |
50次 |
BK-P64714 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無(wú)菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
HOB Pellet 人成骨細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHCPEC NAZ-Glu-OHN-BOC-L-谷酸25克BR，98%
CL-0010786-O(人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2鉍試劑Ⅰ 1,3,4-Thiadiazole-2,5-dithiol,98% 1072-71-5 5G 通用試劑
IFNG Others Human 人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN CHO細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 草甘膦 Glyphosctq 1071-83-6
肝細(xì)胞生長(zhǎng)添加物HGSDTT(DL-DITHIOTHREITOL)二硫蘇糖醇蛋白組學(xué)級(jí)白色結(jié)晶粉末FROZENsigma
牦牛皮膚細(xì)胞;BMU-S1 單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞，J774A1細(xì)胞 Raji(Butt's 瘤細(xì)胞)105-75-9反二酸二丁酯Dibutyl fumarate
表皮角質(zhì)細(xì)胞總RNAHEK NAO-叔丁基-L-蘇氨酸O-tert-Butyl-L-threonine質(zhì)量規(guī)格：98%,BR
ITGA5 & ITGB1 Others Human ITGA5 & ITGB1 Heterodimer 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) N-乙酰-D-色氨酸N-Acetyl-D-tryptophan 質(zhì)量規(guī)格：0.98
KYSE30 細(xì)胞D-酪氨酸甲酯鹽酸鹽H-D-Tyr-OMe·HCl質(zhì)量規(guī)格：0.99
CL-0320BC3H1(小鼠細(xì)胞)5×106cells/瓶×22'-甲氧基腺;2'-O-甲基腺苷2'-O-Methyladenosine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元D-纈氨酸D-Valine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B6?；萧斔咎?span>-b-D-葡萄糖苷酸Montelukast acyl-b-D-glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
CD59A Others Mouse 小鼠 CD59a / Protectin / MAC-IP 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 孟魯司特Montelukast Ether質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
C26瘤 孟魯司特亞砜(非對(duì)映)Montelukast Sulfoxide(Mixture of Diastereomers)質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
THLE-3肝永生化細(xì)胞 THLE-3 human liver immortalized cell MD 21793的BEGM培養(yǎng)基(目錄號(hào)CC3170)二氫孟魯司特鈉鹽Dihydro Montelukast Salt質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
INHBB Protein Human 重組 Inhibin beta B / INHBB / Activin B 蛋白 (His 標(biāo)簽)25-羥基孟魯司特25-Hydroxy Montelukast質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
CL-0382MDA-MB-415(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2丹酚酸B（標(biāo)準(zhǔn)品）Salvianolic acid B質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW620 [SW 620;SW-620] 大鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL丹酚酸C（標(biāo)準(zhǔn)品）Salvianolic acid C質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
EAC 小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞丹酚酸D(標(biāo)準(zhǔn)品)Salvianolic acid D質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
IL17F Others Human 人 IL-17F / Ierleukin-17F 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 膽(標(biāo)準(zhǔn)品)Cholesterol質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
人晶體上皮細(xì)胞永生系;SRA01/04(HLE)膽Cholesterol質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative
real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
牛呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR 試劑盒主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
