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上海帛科生物技術(shù)有限公司
   
     
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Ar A4 電擊感受態(tài)細胞
起訂量 (瓶)價格
1-10￥2350 /瓶
≥10￥1250 /瓶
  • 品牌：帛科
  • 產(chǎn)地：進口、國產(chǎn)
  • 貨號：BK-G63313
  • 發(fā)布日期： 2021-02-21
  • 更新日期： 2024-12-24
產(chǎn)品詳請
產(chǎn)地 進口、國產(chǎn)
保存條件 低溫冷藏
品牌 帛科
貨號 BK-G63313
用途 產(chǎn)品僅用于科研
組織來源 詳見說明書
細胞形態(tài) 詳見說明書
是否是腫瘤細胞 否
CAS編號
保質(zhì)期 詳見說明書
器官來源 詳見說明書
免疫類型 詳見說明書
品系 詳見說明書
生長狀態(tài) 詳見說明書
物種來源 詳見說明書
包裝規(guī)格 50ul*10 50ul*50
純度 %
是否進口 是
規(guī)格參數(shù)：

產(chǎn)品名稱：Ar A4 電擊感受態(tài)細胞
規(guī)格 ：50ul*10 50ul*50
分類：發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞  
用途：生化試劑（用于科研試驗研究）
儲存條件: -70℃保存，必須加干冰運輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個月。
外觀:（性狀） 干冰運輸，單加10kg干冰費
單位: 袋

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注意事項：
1. 感受態(tài)細胞*在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
同一批感受態(tài)細胞，用含目的片段的T載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（陽性對照）能長出密密麻麻的菌落，而用另一種載體和目的片段的連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化，卻一個菌都沒長出來，重復(fù)了三次都這樣。請問這是感受態(tài)細胞的制作不過關(guān)，還是連接出了問題？哪個可能性大些？
答：應(yīng)該是連接的問題。所有連接反應(yīng)建議同時轉(zhuǎn)化酶切后的質(zhì)粒作為另一個陰性對照，確定酶切是否完全。同時連接前請確定質(zhì)粒和片段濃度達到最小連接量的要求。
感受態(tài)細胞放到-80冰箱了有半年了，還能用來轉(zhuǎn)化質(zhì)粒嗎？
答：如-80冰箱儲存過程中沒有發(fā)生凍融的情況，是可以用來轉(zhuǎn)化的，但是由于凍存時間過長，轉(zhuǎn)化效率會有所下降，如果用于普通的質(zhì)粒重轉(zhuǎn)或TA克隆等高效連接體系也是可以的，如珍貴的樣品請選用較為新鮮的感受態(tài)細胞。
操作方法：
1. DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

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（標準品）Oxymetazoline 質(zhì)量規(guī)格：含量測定  RatclusterOfdiffereiation,CD44ELISA試劑盒大鼠CD44分子(CD44)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  HumansmoothmuscleMyosin,SMMELISA試劑盒人平滑肌肌球蛋白(SMM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

雙羥萘酸（標準品）Pamoic acid質(zhì)量規(guī)格：含量測定  小鼠胸腎表達趨化因子(BRAK)ELISA試劑盒 ，英文名： BRAK ELISA Kit  ELISAKitSmIg小鼠細胞膜表面球蛋白規(guī)格：48T/96T

酚酞（標準品）Phenolphthalein質(zhì)量規(guī)格：含量測定  兔子樣生長因子1(IGF-1)ELISA檢測試劑盒rabbitInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISAKit 96T/48T  HumanC4bindingprotein，C4BPELISAKit人C4結(jié)合蛋白(C4BP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

犬葉酸(FA)ELISA檢測試劑盒CanineFolicacid,FAELISAKit 96T/48T  20316-62-5密蒙花苷  Tiliroside

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