幼蟲芽胞桿菌探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒樣品RNA的抽提:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測(cè)
1)紫外吸收法測(cè)定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測(cè)定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計(jì)算公式為:A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
自噬相關(guān)蛋白1抗體
β淀粉樣肽1-16/Aβ1-16 抗體
腺瘤性息肉調(diào)節(jié)蛋白抗體
銜接因子蛋白含pH域蛋白1抗體
水通道蛋白-7抗體
谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶1抗體
p21活化蛋白激酶ARHG7抗體
磷酸化肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體
2-氨基乙硫醇雙加氧酶抗體
血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體
腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體
去整合素樣金屬蛋白酶19抗體
原癌基因AF4蛋白抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣1蛋白抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣2蛋白抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣3蛋白抗體
去整合素樣金屬蛋白酶20抗體
去整合素樣金屬蛋白酶23抗體
去整合素樣金屬蛋白酶28抗體
去整合素樣金屬蛋白酶32抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣4蛋白抗體
膜粘連蛋白9抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶15型抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶2型抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶8型抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶9型抗體