哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
9. 用75℅乙醇洗滌RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75℅乙醇。2-8℃不超過7500×g離心5分鐘,棄上清。
10.室溫放置干燥或真空抽干RNA沉淀,大約晾5-10分鐘即可.不要真空離心干燥,過于干燥會導(dǎo)致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl無RNase的水或0.5℅SDS,用槍頭吸打幾次,55-60℃放置10分鐘使RNA溶解.如RNA用于酶切反應(yīng),勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅的去離子甲酰胺溶解,-70℃保存。
硫酸角質(zhì)素抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： Keratan Sulfate
角質(zhì)細(xì)胞生長因子調(diào)節(jié)蛋白2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KRG2
鉀離子通道蛋白G蛋白4抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KCNG4
鉀通道多聚體結(jié)構(gòu)域KCTD18抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KCTD18
胞質(zhì)接頭蛋白Keap1 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KEAP1
舞蹈癥相關(guān)蛋白KALRN抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KALRN
細(xì)胞內(nèi)流鉀通道蛋白Kir4.1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： Kir4.1
腎病樣蛋白3抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KIRREL3
KLF樣轉(zhuǎn)錄因子7抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KLF7
Kelch樣蛋白8抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KLHL8
鉀離子通道蛋白家族KCNQ2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KCNQ2
鉀離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KCTD7
鉀通道蛋白1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： Kv1.1
電壓門控鉀通道蛋白1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KCNAB1
微管驅(qū)動蛋白家族成員1A抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KIF1A
鉀離子通道蛋白家族成員1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KCNE1
鉀離子通道蛋白家族成員1樣蛋白抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KCNE1L
鉀離子通道蛋白家族成員2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KCNE2
G蛋白激活內(nèi)向鉀通道5抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KCNJ5
鉀離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱： KCTD12